對于同類或結構類型近似的物質(zhì)，若采用萃取、簡單的離子交換法都很難分離時，可采用色譜法進行分離。
①薄層色譜(TLC)法
TLC法是把載體均勻地涂布在玻璃板上形成一薄層，將欲分離的樣品點加在薄層上，然后用合適的溶劑展開，以達到分離和鑒定的目的。載體有硅膠和氧化鋁等。薄層色譜不僅適用于少量樣品的分離，也可用于較多樣品純化。薄層色譜在表面活性劑的分離上有很廣泛的應用。
②紙色譜法
紙色譜是將試樣點在濾紙上，通過溶劑展開而分離。紙色譜法常用的濾紙有進口的Whatman紙，紙色譜的使用范圍與薄層色譜類似。
③柱色譜法
柱色譜是將吸附劑（硅膠和氧化鋁）裝入玻璃柱中，再用用極性不同的溶劑作梯度洗脫，洗脫時一般按溶劑的極性由小到大順序加入，常用的有機溶劑按極性由小到大的順序排列如下:?正己烷<石油醚<環(huán)己烷<四氯化碳<苯<甲苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<水<乙酸<甲酸。
柱色譜常用于分離各種類型的非離子組分，柱色譜在紡織助劑混合物中分離常被推薦。雖然柱色譜目前已發(fā)展為分離效果更佳的高壓液相色譜，但由于其分離量可以隨意選擇，故仍然被經(jīng)常使用。
④氣相色譜（GC）和高壓液相色譜（HPLC）法
氣相色譜：將樣品裂解成可揮發(fā)的小分子，再用氣相色譜直接分離和鑒定這些物質(zhì)。氣相色譜的分離效率據(jù)所有色譜之首，選用合適的固定相和操作條件，能將沸點差別很小的物質(zhì)分開，但可惜其分離量實在太小，一般作為鑒定的手段使用。高壓液相色譜選用溶劑做流動相，對于揮發(fā)性低，熱穩(wěn)定性差、分子量大的高分子化合物，以及離子型化合物都可以分離。在分析分離時，氣相色譜（GC）和高壓液相色譜（HPLC）法兩者可以互補，但均需標樣，現(xiàn)在有將GC和?HPLC與MS聯(lián)用的儀器，改進了分析時需標樣的缺點，但儀器太貴，一般實驗室難以配備。
